过氧化氢酶活性测定（过氧化氢酶活性测定方法）

原理:淀粉遇到碘，形成蓝色化合物。淀粉酶能把淀粉水解成麦芽糖，麦芽糖加碘后不会形成蓝色的化合物。

1.材料:新配制的淀粉酶溶液、鲜肝研磨液、可溶性淀粉溶液、双氧水溶液等。

2.步骤:

(1)探索温度对酶活性的影响。

温度对酶活性的影响

在温度对酶活性影响的实验中，除了温度外，三个试管的条件都是一样的。3号试管在60℃，酶活性最高，试管内淀粉分解，滴加碘溶液后不会变蓝。2号试管的温度条件是100℃，所以淀粉酶在高温下已经失去活性，1号试管的温度条件是O℃，在低温下抑制淀粉酶的活性。所以2号和1号试管中的淀粉还没有分解，滴加碘溶液后会变蓝，这个实验可以证明。酶的催化需要适宜的温度条件，温度过高或过低都会影响酶的活性。

(2)探索pH对酶活性的影响。

1实验过氧化氢(H2O2)在过氧化氢酶的催化下可以分解为水和氧气。可以用火星放入木条中，看是否可以重新点燃，检测是否产生氧气。

步骤试管1试管2试管3

1加入2mL2mL2mL过氧化氢溶液。

2加入1毫升蒸馏水—

加入3毫升盐酸溶液

加入氢氧化钠溶液——1毫升。

5滴肝研磨液，2滴，2滴

67℃水浴5min5min。

7检查

检查有火星的木条有无复燃现象。

试管内产生气泡:产生气泡，不产生气泡，不产生气泡。

2号试管加盐酸，溶液pH值低。3号试管加氢氧化钠，溶液pH值高。在pH过低或过高的环境中，过氧化氢酶失去活性，不能分解过氧化氢。没有氧气产生，但是没有酸或碱加入到1号试管中。溶液接近中性，过氧化氢酶将过氧化氢分解成水和氧气，导致木条复燃。

2实验

原理:淀粉在淀粉酶的作用下分解成麦芽糖，麦芽糖能与灼烧试剂发生氧化还原反应，生成砖红色沉淀。

步骤试管1试管2试管3

1加入2mL2mL2mL可溶性淀粉溶液。

2加入1毫升蒸馏水—

加入3毫升盐酸溶液

加入氢氧化钠溶液——1毫升。

5加入2滴2滴2滴新制备的淀粉酶溶液。

60℃水浴5min5min。

7加入2mL2mL2mL点火试剂。

80℃-60℃水浴2min2min2min。

9观测结果显示，有砖红色沉积物，无任何。

实验记录如下:1号试管有砖红色沉淀，2号试管无砖红色沉淀，3号试管无砖红色沉淀。

2号试管加盐酸，溶液pH值低。3号试管加氢氧化钠，溶液pH值高。在这样的pH环境下，淀粉酶失去活性，不能分解淀粉，所以试管中加入任斐林试剂后没有出现砖红色沉淀。1号试管中没有加入酸或碱，溶液接近中性。这样的pH值适合淀粉酶发挥催化作用，使淀粉分解并与灼烧试剂反应生成砖红色沉淀。以上实验可以证明，酶的催化作用需要合适的pH，pH过低或过高都会影响酶的活性。

例:①酶浓度对酶促反应的影响:当底物充足，其他条件固定，反应体系中不含抑制酶活性的物质和其他不利于酶发挥作用的因素时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。

②底物浓度对酶促反应的影响:底物浓度较低时，反应速度随底物浓度的增加而加快，几乎与底物浓度成正比。底物浓度高时，反应速度加快，但不显著。当底物浓度较大并达到一定限度时，反应速率达到最大值。此时，即使底物浓度增加，反应也几乎不变。=。

③pH对酶促反应的影响:每种酶只能在一定的pH范围内显示活性，超过这个范围酶就会失去活性。其特点是曲线变化。在一定的条件下，每种酶在一定的pH值下活性最大，称为该酶的最适PH值。

④温度对酶促反应的影响:在一定温度范围内，酶促反应的反应速度随温度的升高而加快；但是，当温度升高到一定限度时，酶促反应的速率不仅停止加速，反而随着温度的升高而降低。在一定的条件下，每种酶在一定的温度下活性最大，称为该酶的最适温度。