石蜡切片步骤说明 石蜡切片有什么用

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什么是石蜡切片？

石蜡切片是组织学常规切片技术中最广泛使用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学、法医学等学科研究、观察和判断细胞组织形态变化的主要方法，在许多其他学科中也得到了广泛应用。

石蜡切片程序说明

石蜡切片法包括选料、固定、洗涤脱水、透明、浸蜡、包埋、切片粘贴、脱蜡、染色、脱水、透明、密封等步骤。一般组织从材料固定到密封制成玻片标本需要几天时间，但标本可以长期保存和使用，是永久性的显微玻片标本。

1.材料

应根据需要选择材料来源和零件。比如在植物细胞有丝分裂中，经常选择洋葱根尖，细胞分裂快，容易切割。

2.固定的；不变的

将切好的新鲜材料用适当的化学溶液-固定液浸泡成小块，使细胞和组织中的物质成分迅速凝固或沉淀，停止细胞的所有代谢过程，防止细胞自溶或组织改变，尽可能保持细胞在体内的结构。固定可以使组织变硬，有利于切片，还具有媒染剂浸渍的作用，有利于组织着色。固定剂有很多种，对组织的硬化和收缩程度以及组织中的蛋白质、脂肪、糖等物质有不同的影响。因此，应根据要显示的内容选择合适的固定液体。

3.洗涤和脱水

固色后需要去除组织中残留的固色液及其晶体沉淀，否则会影响后期染色效果。这一步叫做洗涤。大部分都是用自来水洗的。如果用含苦味酸的固定剂固定，需要多次用酒精浸泡。用酒精或酒精混合物固定的组织可以直接脱水，无需清洗。固定或洗涤后，组织充满水。如果不去除水分，则不能进行后续的透明、浸蜡和包埋处理。原因是大多数透明剂是苯，苯和石蜡不能与水混合，水不能完全去除，苯不能浸入。酒精是一种常用的脱水剂，可与水相和透明剂混合使用。为了减少组织材料的急剧收缩，应采用从低浓度到高浓度的递增顺序。

4.透明度

纯酒精不能用石蜡溶解，需要用一种可以用酒精和石蜡溶解的溶剂来代替组织中的酒精。当材料块浸入这种介质浸液中时，它变得透明。这种液体叫透明剂，透明剂浸泡的过程叫透明。常用的透明剂有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等。各种透明剂都是石蜡的溶剂。

5.浸蜡包埋

用石蜡代替透明剂，使石蜡浸入组织中支撑。通常，将组织材料块浸泡在融化石蜡和二甲苯的等量混合物中1 ~ 2小时，然后浸泡在两种融化石蜡液体中约3小时。浸蜡应在比石蜡熔点高3℃左右的温度箱中进行，以利于石蜡浸入组织中。将浸蜡后的组织材料块放入盛有蜡液的容器中(放在蜡的位置)，待蜡液表层凝固后，迅速放入冷水中冷却，制成含组织块的蜡块。容器可以用光亮厚纸折叠成纸盒或金属嵌框盒。如果有许多嵌入的组织块，应该对它们进行编号以避免错误。石蜡融化后，使用前应在蜡盒中过滤，以免杂质影响切片质量，并可能损坏切片刀。石蜡的熔点通常为56 ~ 58℃或60 ~ 62℃，可根据季节和操作环境温度选择。

6.薄片

将嵌蜡块用刀片修剪成规则的四棱柱体，用少许热蜡液将嵌蜡块底部快速贴在小木块上，卡入旋转式切片机的蜡块钳中，使蜡块的截面与切片刀片平行并拧紧。刀是否锋利，蜡块硬度是否合适，直接影响切片的质量，可以通过热水或冷水适当改变蜡块硬度。

7.贴片和烤片

将展平的蜡片用粘合剂牢固地附着在载玻片上，以防止两者在脱蜡、水合和染色等后续步骤中滑落。粘合剂是蛋白质甘油。首先在干净的载玻片上涂上一层薄薄的蛋白甘油，然后切一定长度的蜡带(连续切片)或用刀片切成单个蜡片，放入温水(约45℃)中展平，然后捞出摊平，或直接在载玻片上滴两滴蒸馏水，然后将蜡片放在水滴上，稍加热摊平，最后用滤纸吸干多余的水分，将载玻片放入45℃的温箱中晾干，或置于30℃。

8.切片脱蜡和水合

干燥后的切片需要脱蜡和水化才能在水溶性染料溶液中染色。用二甲苯脱蜡，然后逐步通过纯酒精和梯度酒精，直至蒸馏出水。如果染料是在酒精中制备的，当切片移动到接近酒精的浓度时，可以对其进行染色。

9.给…染色

染色的目的是使细胞组织中不同的结构呈现不同的颜色以供观察。未染色细胞和组织的折射率相似，难以鉴别。染色后，可以显示细胞和不同类型细胞组织中的不同细胞器和内容物。染料有很多种。应根据观察要求和研究内容采用不同的染料和染色方法，选择合适的固色剂，以获得满意的结果。

10.切片脱水，透明，密封

染色切片不能在显微镜下观察，需要用梯度酒精脱水，在95%和纯酒精中的时间可以适当延长，以保证彻底脱水。如果染料溶液由酒精制成，则应缩短在酒精中的时间，以避免变色。二甲苯透明后，迅速擦去材料周围多余的液体，滴适量(1 ~ 2滴)中性胶，然后将干净的盖玻片向下倾斜，避免产生气泡。密封玻璃后，做一个永久性的玻璃标本，在光学显微镜下可以长时间反复观察。注意，有些染料需要特定厂家生产的产品。根据各种染色方法、组织类型和切片厚度，掌握合适的染色时间可以达到更好的染色效果。

石蜡切片的使用

石蜡切片是组织学常规切片技术中最广泛使用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学、法医学等学科研究、观察和判断细胞组织形态变化的主要方法，在许多其他学科中也得到了广泛应用。在教学中，光镜下观察的切片标本大多采用石蜡切片法制备。活体细胞或组织大多无色透明，各种组织与细胞内结构之间缺乏对比，一般光镜下不易分辨清楚。离开身体后，组织很快就会死亡，导致组织腐败，失去原有的正常结构。因此，组织应固定，石蜡包埋，切片染色，避免细胞组织死亡，其形态结构可清晰识别。